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elisa操作好能手都需要知道这些

更新时间:2024-01-25      浏览次数:707

       Elisa实验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。


    咱们就来谈谈ELISA试剂盒需把握的关键有哪些技巧?


1.小心汲取试剂并严格遵守给定的孵育时刻和温度。请注意在汲取标本/规范品,酶结合物或底物时,第一个孔与最后一个孔加样之间的时刻距离假如太大,将会导致不同的 “预孵育"时刻,然后明显地影响到测量值的准确性及重复性。

2.在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。一切试剂瓶盖须盖紧以避免蒸发和污染,试剂避免受到微生物的污染,因为蛋白水解酶的干扰将导致呈现错误的结果。
3.浓洗涤液会有盐分出,稀释时可在水浴中加温助溶。
4.试剂盒保存:部分试剂保存于-20℃,部分试剂保存于2-8℃,具体以标签上的标示为准。

5.刚敞开的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对试验结果造成任何影响。

6.一切的样品都应管理好,依照规则的程序处理样品和检测设备。


我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的,如血浆血清、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等等,不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的第一步,下面简单介绍一下细胞裂解液样本及组织匀浆样本的正确采集、处理方法。


细胞裂解液:

1.吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2.收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。
3.加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
4.将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
5.4℃10000×g 离心10min,除去细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。


组织匀浆液:

1.将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。
2.将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充分。
3.将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。(通常按组织重量:PBS体积=1:9的比例匀浆,例如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)。
4.吸取匀浆液到离心管,4℃5000×g 离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
注意:保证样本不含NaN3,因为NaN3会抑制HRP的活性,从而导致假阴性的结果。





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