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斑马鱼17α,20β-双羟孕酮(17α,20β-DHP)ELISA检测试剂盒说明书

更新时间:2025-01-15      浏览次数:166

斑马鱼17α,20β-双羟孕酮(17α,20β-DHP)ELISA检测试剂盒

使用说明书


 

检测范围

0.625ng/ml--20ng/ml

 

检测原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本斑马鱼17α,20β-双羟孕酮(17α,20β-DHP)水平。用纯化的斑马鱼17α,20β-双羟孕酮(17α,20β-DHP)捕获抗体包被微孔板,制成固相体,往包被的微孔中依次加入斑马鱼17α,20β-双羟孕酮(17α,20β-DHP),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的斑马鱼17α,20β-双羟孕酮(17α,20β-DHP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中斑马鱼17α,20β-双羟孕酮(17α,20β-DHP)含量

样品收集、处理及保存方法

1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

酶标仪(450nm

高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

37℃恒温箱

蒸馏水或去离子水

操作注意事项

严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

在储存和温育时避免强光直接照射。

平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

不能使用过期产品。

如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8

12孔×4

标准品

0.3mL*6

0.3mL*6

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1

注:

1.  标准品浓度依次为201052.51.250.625ng/ml.

2.  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

试剂的准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

洗板方法

手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。  自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步骤

  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

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