ELISA实验洗涤技术要点

1. 手工洗板：
操作步骤：每次反应温育后，将反应液吸出或甩干，然后在板孔中加满洗液，放置2～3分钟，再将洗液吸出或甩干并用吸水纸拍干。重复洗涤3～4次，最后拍干。
注意事项：

1. 洗液量：加入的洗液量应以刚满反应孔为限，避免孔口内有游离酶未洗净。

2. 避免孔间污染：吸液或甩干时要垂直，避免交叉感染。

3. 吸水纸：使用一次性吸水纸，选择不易脱落碎屑的材质。

4. 拍干：拍干时用力要轻，避免抗原抗体复合物脱落，且时间应尽量短以防止酶失活。

2. 洗板机洗板：
优势：速度快，条件恒定，人为因素少。
操作要点：

1. 洗涤参数：确保所有反应孔的洗涤量相同，通常建议使用350μl洗涤液进行洗涤。

2. 洗涤次数：一般要求洗涤4～5次，过多或过少都会影响结果，过多可能降低信号强度，过少则可能增加假阳性。

3. 吸液高度：调整吸液高度，避免残留过多未结合物。

4. 吸头类型：浮动洗头可自动调整，刚性洗头需要精确调整吸液高度。

3. 洗板技术：
洗涤量：根据试剂盒推荐，调整至足够覆盖整个反应孔壁的量。
吸液操作：垂直倒液，迅速、干脆，避免手腕左右摇摆或旋转。
残留液体：残留量越少，背景信号越低，但需避免吸头压得太紧导致吸液效率降低。

4. 洗液配方：
非离子型洗涤剂：如吐温20，浓度在0.05%～0.2%之间，过高会解吸附抗原或抗体。
流水冲洗：适用于微量滴定板，增加水流量或水压可增强洗涤效果，但需注意防止孔间污染。

5. 洗涤缓冲液：
配制：使用新鲜无污染的蒸馏水或去离子水配制，避免结晶影响。
使用：现配现用，确保洗液新鲜。

6. 洗涤后的处理：
拍干：拍干后应尽快进行下一步操作，减少暴露时间以防止酶失活。
板布局：记录每次洗涤的顺序，确保每个孔的显色时间一致。