小鼠ELISA试剂盒基于抗原抗体特异性结合原理

更新时间：2025-12-26

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　　小鼠ELISA试剂盒基于抗原抗体特异性结合原理，采用双抗体夹心法等检测模式。先将特异性抗体包被在微孔板形成固相抗体，加入待测样本后，目标抗原与固相抗体结合，再加入酶标记的检测抗体，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。洗涤去除未结合物质后，加入底物(如TMB)，酶催化底物显色，颜色深浅与抗原量正相关。用酶标仪测定吸光度，通过标准曲线计算抗原浓度。

　　小鼠ELISA试剂盒的测定步骤：

　　1.样本准备：推荐使用血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞上清或组织匀浆等样本类型。血清/血浆样本采集后应立即离心，取上清分装保存于-80℃，避免反复冻融；组织样本需在冰浴中匀浆，使用预冷的生理盐水或RIPA缓冲液，匀浆后同样离心取上清。所有样本在使用前需恢复至室温并充分混匀。

　　2.试剂准备：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水准确稀释至工作浓度，现配现用。标准品按说明书梯度稀释，建议使用多通道移液器以提高一致性。酶结合物与显色液需避光保存，使用前平衡至室温并轻柔混匀。

　　3.加样操作：在酶标板上设置标准品孔、待测样品孔和空白孔。标准品孔按照特定顺序进行稀释和加样，确保每孔加样量准确。待测样品孔先加样品稀释液，再加待测样品，轻轻晃动混匀。加样时应将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁。

　　4.温育与洗涤：用封板膜封板后置37℃温育一定时间。温育结束后，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置一段时间后弃去，重复多次，拍干。

　　5.加酶与再次温育洗涤：每孔加入酶标试剂(空白孔除外)，重复温育和洗涤步骤。

　　6.显色与终止：每孔先加入显色剂A，再加入显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色。显色适当时，每孔加终止液终止反应。

　　7.测定：以空白孔调零，在特定波长下测量各孔的吸光度值。根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。

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