人桩蛋白2(Pax2)试剂盒所使用的抗体具有高度特异性和亲和力，能够准确地识别并结合目标抗原，即使是低浓度的Pax2也能被有效检测到，提高了检测的准确性和可靠性。基于抗原抗体的特异性结合原理，只针对人桩蛋白2进行检测，避免了与其他相似蛋白或杂质的交叉反应，确保检测结果的真实性，减少假阳性的出现。
具有良好的稳定性和可重复性，在不同的实验条件下，多次重复实验能够得到相近的结果，为科研工作者提供了可靠的数据支持，有利于实验结果的分析。采用高质量的固相载体，如孔底透明度高的微孔板，对抗体或抗原的吸附能力强，能使反应更充分地进行，同时也便于观察显色结果。
试剂盒经过优化处理，自身本底干扰较小，空白对照孔的吸光度值较低，从而突出了样本的真实信号，进一步提高了检测精度。适用于多种类型的样本，包括血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等，方便研究人员根据不同的研究需求选择合适的样本进行检测。
人桩蛋白2(Pax2)试剂盒的测定步骤：
1.准备阶段
-试剂平衡：从冰箱中取出试剂盒，在室温下放置一段时间，使所有组分恢复到室温。这一步骤很重要，因为温度差异可能影响实验结果的准确性。
-配置溶液：根据说明书的要求，用蒸馏水或去离子水稀释浓缩洗涤液等需要的溶液，并充分混匀。注意准确量取液体体积，避免误差。
-设置孔位：在酶标板上确定标准品孔、样本孔和空白对照孔的位置。一般来说，标准品孔用于建立标准曲线，以定量检测样本中的Pax2含量；空白对照孔不加样品及酶标记物，用于校正仪器读数时的基线值。
2.加样环节
-标准品加样：按照说明书规定的浓度梯度，向对应的标准品孔中分别加入不同浓度的标准品各50μL。这些标准品是已知含量的Pax2参考物质，通过它们可以绘制出标准曲线，从而推算出样本中Pax2的浓度。
-样本加样：将待测样本添加到预先设定好的样本孔中，每孔加入的样本量也应遵循说明书的要求，通常也是50μL左右。确保加样过程准确无误，避免交叉污染。可以使用移液器进行准确加样。
-添加抗体与酶结合物：依次向每个孔中加入相应的生物素化抗体以及链霉亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)复合物。这一步的目的是让抗体与样本中的Pax2特异性结合，而HRP则作为信号放大系统的一部分，后续可通过底物显色来检测信号强度。加完后轻轻晃动酶标板，使液体充分混合均匀。
3.温育反应
-第一次温育：将加好样的酶标板盖上盖子，置于特定温度的培养箱中温育一定时间，具体时间和温度参照试剂盒说明书。在此期间，抗原抗体之间会发生特异性结合反应。
-洗涤：温育结束后，弃去孔内液体，用洗涤液充分洗涤每个孔多次，以去除未结合的物质。每次洗涤后都要尽量甩干孔内残留液体，防止干扰后续实验步骤。洗涤次数不足可能导致背景过高，过多则可能洗掉已结合的成分，所以要按照说明书严格控制洗涤次数和方式。
4.显色反应
-加入底物：向洗涤后的每孔中加入TMB底物溶液，在避光条件下进行第二次温育。TMB在HRP的催化作用下会转化为蓝色产物，且颜色的深浅与样本中Pax2的含量成正比。
-终止反应：达到规定的温育时间后，向每孔中加入终止液(如硫酸)，此时蓝色会迅速变为黄色。加入终止液的顺序要一致，以保证各孔间的反应时间相同。
5.结果读取与分析
-吸光度测定：立即使用酶标仪在特定的波长处测定各孔的吸光度值。一般选择450nm作为检测波长。记录下标准品孔、样本孔和空白对照孔的吸光度数据。
-绘制标准曲线：以标准品的浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，绘制出标准曲线。根据样本孔的吸光度值，在标准曲线上查找对应的Pax2浓度，即可得到样本中Pax2的含量。
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更新时间：2025-10-21 
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